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  • [PCR室] 用有機溶劑沉淀法分離與純化蛋白質

    有機溶劑能降低溶液的電解常數,從而增加蛋白質分子上不同電荷的引力,導致溶解度的降低;另外,有機溶劑與水的作用,能破壞蛋白質的水化膜,故蛋白質在一定濃度的有機溶劑中的溶解度差異而分離的方法,稱有機溶劑分段沉淀法,它常用于蛋白質或酶的提純。使...[閱讀全文]

  • [PCR室] 用鹽析方法分離與純化蛋白質

    ①原理:鹽析法對于許多非電解質的分離純化都是適合的,也是蛋白質和酶提純工作應用最早,至今仍廣泛使用的方法。其原理是蛋白質、酶在低鹽濃度下的溶解質隨著鹽液濃度升高而增加(此時稱為鹽溶);當鹽濃度不斷上升時,蛋白質和酶的溶解度又以不同程度下降...[閱讀全文]

  • [PCR室] PCR設置內參照的定量方法

    PCR可分析極微量的DNA,并可同時擴增多種序列,已應用于基因轉錄水平的研究。盡管PCR是一種較理想的核酸定量方法,但實驗方案的選擇對PCR定量的成功與否極為重要,因為PCR是一個指數過程,控制反應率的任一參數的微小變化都會顯著影響產物的生成量,在這些...[閱讀全文]

  • [PCR室] PCR檢測常見問題匯總(精品)

    PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好于當日電泳檢測,大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性,不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備,②引物的質量與特異性,③酶的質量及, ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究...[閱讀全文]

  • [PCR室] 基因調節元件的特點及用途

    基因調節元件的測繪和分析(gene regulatory elements mappmg and analysis,GREMA)技術是由加州大學圣地亞哥分校(UCSD)付向東博士領導的研究小組發明的,并已經獨家授權給ASB做商業開發。這一技術通過以下方法克服了第一代ChIPChip分析的限制。首先它不用免...[閱讀全文]

  • [PCR室] 限制性酶及PCR的技術

    限制性酶及PCR的方法 此法將MSRE和PCR技術的結合,大大提高了檢測DNA甲基化的靈敏度。該法基于DNA經MSRE切割后,位于限制性位點側翼的特異性引物僅能有效擴增那些甲基化而免于切割的DNA片段,但不能擴增未甲基化且遭受切割的DNA片段。本法定性只需0.6ngDNA...[閱讀全文]

  • [PCR室] 基因芯片實驗操作流程

    1.樣本DNA或RNA制備 芯片實驗中核酸的抽提沒有特殊之處,參照常規的分子生物學實驗手冊就可以。但對于RNA樣本,由于RNA的穩定性很差,在活體內的半衰期也很短,因此取材一定要新鮮,取材后迅速保存在液氮中,在整個處理過程中要非常小心,以免降解,影響實...[閱讀全文]

  • [PCR室] PCR檢驗標本接收程序SOP文件

    一、 目的 保證實驗室工作的正常運行,以及時準確的獲得實驗結果。 二、 適用范圍 從事分子生物實驗室工作的檢驗專業人員。 三、 職責 分子生物檢驗室派出專門人員負責標本的接收。 四、 工作程序 1. 分子生物檢驗人員接收標本是首先應注意核對檢驗單:科別...[閱讀全文]

  • [PCR室] 大腸桿菌的DNA基因探針技術基因芯片檢測技術

    主要有EHEC毒性質粒、VTl、VT2、EAE基因探針。Hudk等使用EHEC 0157:H7質粒的限制性片段VPMl探針進行研究,發現所有的產毒性大腸桿菌和非大腸桿菌均為陰性,50株產Vero毒素的非0157僅5株出現陽性反應,而提高反應溫度至45℃,5例假陽性可轉變為2例陽性、3例...[閱讀全文]

  • [PCR室] 原位免疫PCR的IHC增敏技術方法

    (一)基本原理 Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功,建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統,利用細胞工程和基因工程技術,巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合,通過構建單克隆抗體與重組...[閱讀全文]

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