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免疫金銀染色(IGSS)操作流程

時間:2010-12-17 01:17|來源:實驗室前沿| | 分享|點擊:


石蠟切片IGSS

    (1)切片脫蠟至水。
    (2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修復20min(98℃),自然冷卻至室溫。
    (3)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min。
    (4)l%EA(卵蛋白)15min,不洗。
    (5)適當稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h。
    (6)0.05m01/L(pH7.4)TBS洗3×5min。
    (7)0.02m01/L(pH7.4)TBS(內含0.1%BSA)洗10min。
    (8)1%EA 15min,不洗,1:10~1:20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h,或37℃孵育30min。
    (9)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min。
    (10)1%戊二醛洗10min。
    (11)雙蒸水洗5min。
    (12)1%明膠洗5min。
    (13)銀避光顯影8~15min。
    (14)雙蒸水洗15min。
    (15)固定:用顯影定影液(1:4或1:10)固定5min,也可以用15%硫酸鈉-20%硫代硫酸鈉混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃溫水洗3~6min。
    (16)襯染,核固紅襯染3min或甲基綠襯染3min。
    (17)常規脫水,二甲苯透明,常規樹膠封片。
    (18)鏡檢:陽性物質呈黑色或黑褐色,顆粒分布于抗原—抗體反應部位;背景較干凈,呈紅色。
 
   胃未分化癌IGSS-P53              HCC IGSS-HBsAg
核內內呈黑色陽性表達,背景為紅色,×400    細胞漿內呈黑色陽性,×200
 
冰凍切片IGSS
    做冰凍切片的組織可先經過固定再作切片,也可先制作冰凍切片,然后再固定。這要根據保存抗原的需要而定,固定過的組織可用含20%蔗糖的PBS(0.1mol/L,pH7.4)浸泡過夜,使切片減少冰結晶,保持組織細胞良好的形態結構。切片人0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min,染色步驟同石蠟切片。
Tags:操作,流程,金銀,免疫,
責任編輯:何輝

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