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免疫組化(IHC)抗原修復必須注意的問題

時間:2012-03-08 00:29|來源:實驗室前沿| | 分享|點擊:


1.PH值的應用范圍及選擇。

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應用于抗原修復的物質很多,但至今為止,大家公認的最好的抗原修復液還是檸檬酸鹽緩沖液PH6.0,據多年來的實踐認為,該液確實很好,它適合于大多數的抗原,在常規應用的臨床標記抗體中基本都適用,經用該液修復后的抗原表達增強,抗原的定性和定位很理想,結果不錯。但近來也有文獻報道,應用抗原修復液PH8.0的效果也不錯。 dedecms.com

2.抗原修復時應選擇最佳溫度。 內容來自dedecms

據Masson等研究表明:70℃-90℃的溫度對沒有經固定的蛋白可發生變性,但經福爾馬林固定的蛋白,要使其發生變性,溫度必須在92℃↑。據實驗認為溫度在92℃-98℃是合適的,尤其在95℃為最好,這是因為:①這種溫度未達沸騰,切片不容易脫離裁片;②能夠解離和破壞與蛋白交聯的甲醛醛鍵等,處理時可以隨意選擇和確定抗原修復的作用時間。

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3.抗原修復時有效溫度所需持續時間根據各單位的設備條件以及使用的儀器不同,抗原修復時在有效的溫度范圍內所持續的時間也不一樣。

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例如:真空負壓抗原修復法,當達到預定的溫度和所需的負壓(66.7KPa)后可持續5-10分鐘,微波輻射抗原修復法溫度不好控制,抗原修復液容易沸騰,如果切片附貼任憑其沸騰持續5-10分鐘。如果切片附貼很牢固,為了防止脫片,一發現抗原液已沸騰,即可關掉電源,待溫度下降后,又可重開電源。如此反復數次,使之持續10分鐘。不過似這種停停開開著的做法效果不如開著的,因為開著的除了熱效應以外,還有足量的微波輻射。應用高壓抗原修復法,當發現抗原修復液沸騰后,加上壓力閥,出現噴氣后,可持續時間達2-4分鐘。隔水熱加熱抗原修復法,要特別注意內外液體的溫度,內液指抗原修復液,外指浸泡抗原修復液容器的水,應用時用溫度計浸入抗原修復液測試,使之保持在有效的溫度(92℃↑)范圍內。持續時間在40分鐘,電爐加熱抗原修復法,其持續時間在10分鐘以上。由于效果較差,該法目前較少使用。

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4.抗原修復液必須遵循自然降溫規律,否則效果不好或達不到抗原修復的目的。 織夢內容管理系統

抗原修復持續時間過后,取出放于室溫中讓其慢慢地降溫,決不能為了爭取時間,強行用冰塊或冷水令其降溫。這是因為當高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其它的束縛或聯結,要有一個自然環境讓其自然放松下來,隨著溫度的降低,它們會慢慢地恢復原來的形態和構型。如果用冰塊和冷水強行令其降溫,松開后的蛋白分子肽鏈突遇降溫而固定下來,恢復不了原有的構型,達不到預想的效果。 copyright dedecms

5.盡量使用足量的抗原修復液。

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抗原修復的方法,都采用加熱的方法,尤其是微波輻射加熱法,該法由于產熱快。液體容易揮發直至干涸。因此,應用于抗原修復的液體,一定要充足,防止切片干涸。用于抗原修復的切片,如果由于液體少而導致切片的干涸,則應丟棄切片,因為熱干涸的切片中的抗原是沒辦法補救的,因它是一種不可逆的現象。據實驗認為,用于微波輻射抗原修復的液體,量大可多至1000ml。應用大量的抗原修復液時,由于它的量較大,可延緩了液體的沸騰時間,增加了切片受微波輻射的量,對抗原修復將達到徹底。

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6.切片必須附貼牢固。

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用于抗原修復的切片,必須附貼牢固,否則發生掉片,則前功盡棄。 織夢好,好織夢

Tags:必須,注意,問題,修復,抗原,組化,IHC,免疫,
責任編輯:何輝

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