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T、B淋巴細胞功能測定方法

時間:2012-03-17 01:25|來源:實驗室前沿| | 分享|點擊:


淋巴細胞功能測定可分為體內試驗和體外試驗。體內主要是進行遲發型超敏反應,借此間接了解淋巴細胞對抗原、半抗原或有絲分裂原的反應;體外試驗方法包括淋巴細胞對抗原或有絲分裂原的增殖試驗、細胞毒試驗以及其分泌產物功能的測定(淋巴因子的測定見第八章)。淋巴細胞功能測定不僅能夠了解機體免疫功能狀態,而且是免疫缺陷病診斷的主要依據,也有助于探討某些疾病的發病機理、療效判斷、推斷轉歸。

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一、T、B淋巴細胞增殖反應
    測定淋巴細胞體外增殖反應是檢測細胞免疫功能的常用方法。刺激淋巴細胞增殖的物質可分為二大類:①非特異性刺激物:如植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)、美洲商陸(pokeweed mitogen,PWM)、佛波酯(PMA)等有絲分裂原;能產生A蛋白的葡萄球菌(SAC)、EB病毒、鏈球菌溶血毒素S、細菌脂多糖(LPS)等微生物及其代謝產物;胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白物質;抗CD3、CD2、IgM等細胞表面標志的抗體以及某些淋巴因子等;②特異性刺激物:主要是特異性抗原物質,包括各種可溶性抗原和細胞表面抗原。不同的刺激因子可刺激不同的淋巴細胞分化增殖,因而可反映不同淋巴細胞群體的免疫功能。體外測定淋巴細胞增殖反應常采用同位素摻入法和MTT比色法。
   
二、混合淋巴細胞培養
    混合淋巴細胞培養(mixed lymphocyte culture,MLC)或稱混合淋巴細胞反應(mixed lymphocyte reaction,MLR)是來源于兩個個體的淋巴細胞在體外混合培養時,由于細胞表面HLA-Ⅱ類抗原型別不同,可相互刺激對方淋巴細胞轉化(稱為雙向MLC),并產生多種淋巴因子,促進NK、CTL、LAK等殺傷細胞活性。若將刺激的一方淋巴細胞先用絲裂霉素C(mitomycine C)或放射線照射處理,使該細胞失去增殖能力,但仍保持刺激對方淋巴細胞增殖的試驗稱為單向MLC。MLC反應可通過3H-TdR摻入法或MTT法等方法檢測。
MLC主要用于移植前組織配型,以測定供、受者間組織相容性抗原的相容程度。也是免疫調節研究中的實驗模型。 
 
三、細胞毒性T細胞胞毒功能測定
細胞毒性T細胞(CTL)是特異性細胞免疫的主要效應細胞之一,它可通過與靶細胞的直接接觸,特異而高效地殺傷靶細胞。其主要生物學作用為參與抗病毒免疫、抗腫瘤免疫和移植排斥反應。
 
四、B細胞功能的測定
    B細胞在抗原或多克隆刺激劑絲裂原的誘導下分化為漿細胞,產生抗體。因此,實驗室多采用檢測多克隆抗體的產生來測定B細胞產生和分泌抗體的能力。
測定多克隆抗體產生的方法主要有細胞漿(內)Ig的檢測和細胞外分泌抗體的檢測,包括反向空斑形成法、酶聯免疫斑點法及ELISA等。其中ELISA法是一種簡便、特異、敏感的非放射性試驗方法,廣泛用于血清組織標本及細胞培養上清液中Ig含量的檢測。
 
五、LAK/TIL細胞的活性測定
    淋巴因子激活的細胞毒性細胞(lymphokine activated killer,LAK)和腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在機體的免疫防御中起著十分重要的作用,特別是在腫瘤免疫過繼療法中具有重要的應用前景,其活性的檢測對于評價機體的免疫狀態具有重要的意義。
Tags:測定,方法,功能,淋巴細胞,B,T,
責任編輯:丁軍

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